El ensayo de esterilidad es un examen microbiológico que determina si un producto que debe ser estéril está contaminado con microorganismos. Se aplica en la industria farmacéutica, biotecnológica y de dispositivos médicos. Esta guía resume los dos métodos habituales, filtración por membrana e inoculación directa, y qué revisar al elegir el equipo de filtración al vacío.

Para qué sirve el ensayo

El ensayo se aplica a la mayoría de los productos farmacéuticos que deben ser estériles, como inyectables, colirios, fármacos sólidos y diversos dispositivos médicos estériles. Un producto contaminado puede perder eficacia o causar infecciones y otras complicaciones graves al entrar en contacto con el cuerpo. El objetivo es confirmar que los productos declarados estériles, tras una fabricación aséptica o una esterilización terminal, no contienen microorganismos viables.

Definición de esterilidad y normas

Esterilidad es la ausencia de microorganismos viables en una muestra. La referencia internacional para la eficacia de la esterilización es el nivel de garantía de esterilidad (SAL). Un producto se considera estéril si SAL ≤ 10⁻⁶, es decir, si la probabilidad de contaminación microbiana es igual o menor a una en un millón.

Según Rocker, los requisitos del ensayo (ambiente, preparación de la muestra y procedimiento) se definen en normas como USP <71>, la Farmacopea Europea (EP), la Farmacopea Japonesa (JP), la Farmacopea China e ISO 11737-2 para dispositivos médicos. Use la norma que corresponda a su producto.

Condiciones de trabajo

Según la fuente, de acuerdo con PIC/S y las guías GMP de la OMS, el ensayo debe hacerse en condiciones asépticas, en una estación de flujo laminar grado A ubicada en un entorno de sala limpia grado B, o en un aislador validado. El objetivo es eliminar el riesgo de falsos positivos por contaminación del laboratorio. El método se elige según las características de la muestra.

Método 1: filtración por membrana

Es uno de los métodos más usados. Sirve para muestras líquidas, muestras sólidas solubles y dispositivos médicos con conductos que se puedan enjuagar y filtrar.

Principio: la muestra se filtra al vacío a través de una membrana con tamaño de poro de 0,45 µm o menor, que retiene los posibles microorganismos. Luego la membrana se transfiere a un medio de cultivo y se incuba para detectar microorganismos viables.

Equipo: bomba de vacío, manifold de filtración y membranas filtrantes. Los vasos de filtración reutilizables de acero inoxidable se pueden esterilizar en autoclave o a la llama con un mechero de laboratorio, lo que ahorra tiempo de esterilización.

Etapas del método

1. Pretratamiento de la muestra: según el tipo de muestra, se prepara para facilitar el flujo o la filtración (ver tabla).
2. Filtración: se vierte la muestra en los embudos de filtración y se usa una bomba de vacío para filtrar con presión negativa. Para muchas muestras se puede usar un manifold de varias posiciones.
3. Incubación de la membrana: con pinzas estériles se transfiere la membrana al medio de cultivo (habitualmente TSB y FTM), se sella y se incuba a la temperatura adecuada durante 14 días o más.
4. Interpretación: si el medio no cambia, la muestra es estéril y cumple el ensayo. Si el medio se enturbia, hay microorganismos viables y la muestra no cumple.

Método 2: inoculación directa

Se usa con muestras que no se pueden procesar por filtración por membrana, como sólidos insolubles, líquidos de alta viscosidad o no filtrables y dispositivos médicos no aptos para filtración. La muestra se coloca directamente en el medio de cultivo y se observa si hay crecimiento microbiano.

1. Preparación de la muestra: se prepara y se coloca en el medio de cultivo (ver tabla).
2. Incubación: se sella el medio y se incuba durante 14 días o más.
3. Interpretación: igual que en filtración por membrana; turbidez indica crecimiento microbiano y la muestra no cumple.

Compare los dos métodos

Elija el equipo de filtración al vacío

La fuente recomienda un sistema de filtración al vacío con bomba, manifold y herramienta de esterilización:

• Bomba de vacío: Alligator 200, bomba de diafragma para líquidos que descarga directamente el filtrado de desecho, sin botella de residuos; o Rocker 300, bomba de vacío sin aceite.
• Manifold de filtración: manifold de 3 posiciones MultiVac 301-MB o de 6 posiciones MultiVac 601-MB; o manifold rotatorio de 6 o 12 posiciones (SolarVac 601 – MB o SolarVac 1201 – MB).
• Esterilización: un mechero electrónico como Dragon 100, para esterilizar a la llama y sin manos los embudos entre lotes de ensayo.

Rocker destaca dos sistemas completos: MultiVac 301 – MB – A (opciones de 3 y 6 posiciones, armado y desarmado rápido, válvula de venteo) y SolarVac 1201 – MB – T (diseño rotatorio, válvula de control individual, autoclavable, opciones de 6 y 12 posiciones). Confirme en cada ficha qué piezas son autoclavables y la configuración incluida.

Equipos relacionados en Cotecno

Consulte la configuración y variante en cada ficha antes de seleccionar el equipo.

• Sistema de filtración de múltiples ramas MultiVac 301 – MB – A
• Sistema de filtración al vacío SolarVac 1201 – MB – T
• Manifold rotatorio de múltiples ramas SolarVac 601 – MB
• Manifold rotatorio de múltiples ramas SolarVac 1201 – MB
• Bomba de líquidos de diafragma Alligator 200
• Bomba de vacío sin aceite Rocker 300
• Mechero de laboratorio Dragon 100

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Fuentes

• Rocker, ensayo de esterilidad